免疫共沉淀（Co-IP）是利用抗原与抗体之间的专一性作用为基础，用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法。利用免疫共沉淀可以检测两个已知蛋白之间的相互作用，或者利用已知蛋白寻找与之相互作用的未知蛋白。相较于其他分子间相互作用检测方法（GST pull down 等），免疫共沉淀实验的优势在于蛋白的结合在细胞内完成， 能够反应天然状态下的蛋白质相互作用，结果更加真实可靠。

一、实验原理
当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质相互作用被保留了下来，假如细胞内存在 XY 蛋白复合物，用 X（X 也称为诱饵蛋白）的抗体免疫沉淀 X，那么与 X 在体内结合的蛋白质 Y （Y 也称为靶蛋白）也被沉淀下来。因此在细胞裂解液中加入 X 的抗体沉淀蛋白 X，随后利用蛋白印迹（western blot，WB）检测沉淀中是否存在蛋白 Y，如果存在，则说明细胞内存 在 XY 蛋白复合物，即蛋白 XY 存在相互作用。

Co-IP实验流程
免疫共沉淀实验流程为：收集蛋白样品—诱饵蛋白抗体沉淀诱饵蛋白—SDS-PAGE 分离蛋白—WB 检测是否存在 靶蛋白

（1）、收集蛋白样本
蛋白样品通常通过裂解细胞得到。Co-IP 实验通常有两种，一种为内源性蛋白相互作用验证，另外一种为非内源性 蛋白相互作用验证，内源性相互作用是指两蛋白相互作用在细胞内发生，即通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达，表达完成后收集细胞进行裂解得到蛋白样品。非内源性相互作用两蛋白相互作用在细胞外发生， 即将含有靶蛋白的动植物组织、器官进行预处理及细胞裂解获得细胞裂解液，随后将诱饵蛋白（通常为重组表达纯 化获得）加入细胞裂解液中，得到蛋白样品。
（2）、沉淀诱饵蛋白
利用磁珠偶联抗体沉淀诱饵蛋白：在样品中加入磁珠偶联抗体，抗体会与诱饵蛋白结合，利用磁铁将磁珠拉下，同时诱饵蛋白会一起被沉淀出来。如果存在与诱饵蛋白的相互作用的靶蛋白，也会被沉淀下来。如果没有诱饵蛋白的 特异性抗体，可以给诱饵蛋白加上标签（Myc、HA、Flag 等），然后利用标签抗体沉淀蛋白。
（3）、SDS-PAGE 及 WB 检测
得到沉淀后，需要验证沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用 SDS-PAGE 将蛋白复合物分离，随后利用 WB 检测 是否存在靶蛋白（如果靶蛋白的分子量是已知的，可以直接用 SDS-PAGE 检测是否存在靶蛋白）。

二、实验对照设置
为了确保最终得到的结果是天然状态下的相互作用，而不是由于某些方面造成的人工相互作用（也就是“假阳性”），在 Co-IP 的实验设计过程中，需要设置正确的对照。
假设 Co-IP 实验的实验组为“磁珠+抗 X 抗体+靶蛋白 X+目的蛋白 Y”，则可能出现的“假阳性”及对应需要设置 的实验对照如下表所示：

上述为了避免出现“假阳性”的对照称为阴性对照，除此之外 Co-IP 实验还会设置一个阳性对照组（Input 组），Input 组为直接利用抗体 X（抗体 Y）对细胞裂解液进行 WB 检测，验证细胞裂解液中存在蛋白X（抗体 Y）。
在某些 Co-IP 实验中，实验人员会把 IP 后的上清分别进行蛋白 X 和蛋白 Y 的 WB 检测，该对照组称为output 组。 利用内源性 Co-IP 实验为验证两个蛋白是否存在已知作用，如果最终的结果为阳性，则可以证明两个蛋白之间存在相互作用；但如果结果为阴性，无法证明两个蛋白之间不存在相互作用，也有可能是蛋白在细胞内表达量低等原因 导致。因此在进行内源性 Co-IP 验证两个蛋白是否存在相互作用时，建议先做过表达 Co-IP 作为对照。
     
三、客户提供材料
1、新鲜或正确保存的样品（按照我们的要求提供）
2、目的蛋白一抗，空白或者阴性同种属IgG
3、阳性对照样品（尽量提供）
4、相关文献（可选）

四、提交给客户结果
1、客户提供的实验样本
2、实验原始数据
3、完整实验报告

五、服务项目说明
1、双方签订合同后，收取70%预付后启动预实验
2、有特殊要求请咨询：0512-68089543