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染色质免疫共沉淀 (CHIP)检测

一、实验原理
染色质免疫沉淀技术(ChIP)通过与染色质片段共沉淀和PCR技术,在体内检测与特异蛋白质结合的DNA片段。ChIP技术最大的优点就是在活体细胞状态下研究了蛋白质和目的基因结合状况,减少了体外实验的误差。在活体细胞中,先对与调节蛋白结合的染色质进行分离,然后通过一定的方法(例如:超声波)随机剪切染色质,用调节蛋白的抗体沉淀目的染色质,再通过一定手段把目的染色质上的蛋白质去除掉,最后用PCR等方法检测鉴定共沉淀的DNA片段的特性。

二、实验用途
ChIP技术主要分析目的基因有没有活性,或者分析一种已知蛋白(转录因子)的靶基因有哪些;还可以研究组蛋白各种共价修饰与基因表达的关系。

实验染色质免疫沉淀技术(ChIP).jpg


【实验流程】

实验染色质免疫沉淀技术(ChIP)1.jpg


实验染色质免疫沉淀技术(ChIP)2.jpg


实验染色质免疫沉淀技术(ChIP)实验流程.jpg


三、案例展示

实验染色质免疫沉淀技术(ChIP)案例.jpg
【结果分析】
1、阳性对照组条带清晰无杂带,阴性对照组正常,表明CHIP实验结果可信,操作合格;
2、Input组条带清晰可见,表明PCR扩增引物可用于该指标的检测;
3、样本组1和样本组2中检测XX蛋白组均有条带,表明该研究的基因的启动子区和XX蛋白可发生结合。
【常见问题】
1、消化的染色质浓度过低。
2、染色质消化不足且片段过大(大于900 bp)。
3、样品输入对照组PCR反应中无产物或产物很少。
4、阳性对照组蛋白H3-IP RPL30 PCR反应中无产物。
5、阴性对照 Rabbit IgG-IP 和阳性对照 Histone H3-IP PCR 反应中产物的数量相等。
【注意事项】
1、ChIP实验要求必须是新鲜的组织或活细胞,一次实验需至少需要150 mg新鲜的组织或2x10⁷个细胞,如不能提供新鲜的组织或活细胞,请联系客服,获得预处理方法;
2、部分抗体级别可能达不到ChIP级别的要求,需要采购对应级别的抗体并通过阴阳性实验反馈结果可信性;
3、ChIP对照:现有阳性对照H3和阴性对照IgG;
4、采用CST品牌的SimpleChIP® Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads)试剂盒用于本实验。

四、客户提供材料
1、必须是新鲜的组织或活细胞,一次实验需至少需要150 mg新鲜的组织或2x10⁷个细胞,如不能提供新鲜的组织或活细胞,请联系客服,获得预处理方法(按照我们的要求提供)
2、目的蛋白一抗,对照品
3、相关文献(可选)

实验染色质免疫沉淀技术(ChIP)参考.jpg


五、提交给客户结果
1、客户提供的实验样本
2、实验原始数据
3、完整实验报告(图例展示)

六、服务项目说明
1、双方签订合同后,收取70%预付后启动预实验
2、有特殊要求请咨询:0512-68089543

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