蛋白纯化是一项复杂的过程，包括粗分离、初步纯化和精细纯化等多个步骤。它是生物研究领域的一项重要技术。要研究某一个蛋白质，首先就要将这个蛋白从生物体中分离纯化出来蛋白纯化方法主要是利用不同蛋白质的相似性与差异。依据蛋白间的相似性可以去除费蛋白物质，再根据蛋白质的差异性将目的蛋白分离出来。

一、实验原理
蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物中提取出来得到重组蛋白。

二、蛋白纯化步骤——以GsT-Tag纯化为例
试剂准备：Buffer A(50 mM TRIS-HCL pH8.0 5 mM DTT)、 Buffer B(100 mM TRIS-HCL pH8.0 20 mM 谷胱甘肽)
1、装柱：往纯化柱中加入约 2 mL 填料（固体体积），连接恒流泵，自然沉淀后用 50 mL 去离子水洗去乙 醇（商品化填料用 20% 乙醇保存）控制流速为 3 ml/min，流出液体。
2、用 30 mL Buffer A 平衡基质，控制流速为 3 ml/min，流出液体。
3、将破菌离心后的上清（低温 4℃ 保存）与基质在 50 ml 离心管中混合，4℃ 条件下，在混合培养器上结合 30~60 min，将结合后的液体加入到预装柱中，控制流速为 3 ml/min，流出液体，收集流穿液。
 4、加入 50 mL Buffer A 洗去杂蛋白，控制流速为 2 ml/min，流出液体，收集流穿液。 5、加入 Buffer B，用 20 ml Buffer B 洗脱目的蛋白，控制流速为 1.5 ml/min，取 10 ml 离心管收集洗脱液 15-20 ml。
 6、加入 15~20 mL Buffer B 洗去基质中残留的蛋白，然后用 100 mL 纯水清洗纯化柱，控制流速为 3 ml/min，流出液体。
 7、用 20% 乙醇保存柱子，于 4℃ 冰箱中保存。
8、SDS-PAGE 电泳确定蛋白浓度。

 注意事项：
1、在处理基质的所有过程中，要求液体不能流干，混合动作温和，基质中不得有气泡存在。
2、上样前，样品需离心或用滤膜过滤。如果样品太过粘稠，用 pH8.0 的 PBS 稀释，以防堵塞柱子。
 3、样品过渡裂解会引起蛋白变性，降低结合载量，采用温和的裂解方法，增加结合载量。
4、GST 融合蛋白与还原型谷胱甘肽的结合比较缓慢，需要控制上样和洗脱时流速（上样不高于 3 mL/min，洗脱不高于 1.5 mL/min），让其有足够的吸附和分离时间，以便达到最大的结合载量。蛋白的性质、pH、温度等也会影响蛋白的结合载量。
常用的分析纯化方法
包括：膜分离技术、沉淀分离技术、电泳分离技术、层析分离技术。其中膜分离技术与沉淀分离技术属于蛋白粗提取，电泳分离技术主要应用于检测分析。蛋白纯化目前主要选择层析分离技术，通常分为以下几种方法：

三、结果图例

 
四、服务流程
1、客户提交委托纯化申请并明确纯化要求，与公司商定具体的实验项目、数量和费用，双方签订《蛋白纯化制备合同》。
2、客户提供待纯化样品，我公司按照合同要求安排蛋白纯化服务，并在规定时间内完成蛋白纯化委托。
3、纯化完成后，我公司按照客户要求分装，免费低温邮寄给客户，同时提供蛋白纯化报告

五、样品要求
1、抗血清、免疫腹水和细胞上清须告知种属来源，要保证无污染，未长菌变性；可提供液体或冻干粉状态，液体需要低温邮寄转运。
2、重组蛋白应带有His-tag或GST-tag；带其他标签或无标签的重组蛋白，需另行商议纯化方法。
3、如实验需要，客户需提供重组蛋白或天然蛋白序列、分子量、等电点、缓冲液成分及pH等信息。
4、请提前说明样品来源和生物危害等情况，或其他任何特殊情况。

六、客户提供
1、新鲜或正确保存的样品（按照我们的要求提供）
2、阳性对照样品（尽量提供）
3、相关文献（可选）

七、最终交付
1、客户提供的实验样本
2、实验原始数据
3、完整实验报告+显微镜照片

八、服务项目说明
1、对于实验试剂有指定品牌的，请提前告知，可代购。
2、双方签订合同后，收取70%预付后启动预实验
3、有特殊要求请咨询：400-800-8458