克隆形成实验是肿瘤细胞学研究中的一种常用技术，该实验可用来研究肿瘤细胞的增殖能力、侵袭性，探讨细胞对不同杀伤因素的敏感性。

一、细胞克隆形成实验原理
其原理是将细胞分离成单细胞悬液，在培养基上接种培养，根据集落形成数量和大小来检测细胞增殖能力和致瘤性。单个细胞在体外持续增殖6代以上时细胞数量已达60个左右，此细胞群体成为克隆或集落，大小在1.0-2.0 mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力，各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变，通过计数克隆形成率，可对单个细胞的增殖潜力做定量分析，了解细胞的增殖率和对生存环境的适应性。

二、检测方法：
根据培养基是否需要软琼脂，克隆形成实验可以分为平板克隆形成实验（PCF）和软琼脂克隆形成实验（SACF）。PCF是直接将细胞接种于培养瓶、培养皿中，优点为操作简便、细胞间分泌的促生长因子可在培养液中扩散、克隆形成率高，适用于贴壁生长的细胞; 缺点为细胞在 贴壁前易于移动。SACF 是采用半固体培养基模拟体内生长环境，适用于悬浮细胞及不依赖于贴壁生长的肿瘤细胞。在悬浮状态下不能增殖的细胞（如正常成纤维细胞）不适用此法。
1：细胞培养，调整细胞状态
2：制备单细胞悬液
3：按不同的细胞浓度梯度把细胞均匀接种于培养平板
4：培养一段时间
5：观察克隆情况，固定染色后计算克隆形成率

备注：
(1)对数生长期，细胞状态良好的情况下，0.25%胰酶消化，离心后重悬时一定要吹打成单细胞悬液。可以选择6孔板作为克隆培养板，按密度梯度（如100、200、300）接种进孔板中。接种后切记晃动平板，使细胞分布均匀。
(2)培养2周左右（出现肉眼可见细胞集落时），即可固定染色。加固定液和染色液时，覆盖住孔板底层即可。但如果长时间不处理，需增加液体量，防止液体干涸，影响拍照效果。
(3)拍照时，务必使每个孔中无阴影，如无法达到，则逐个孔进行拍照。

注意事项：
(a) 琼脂对热和酸不稳定，若反复加热，容易降解而产生毒性，且硬度下降。因此高压灭菌后应进行分装；
(b) 细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度，否则结果的准确度会受到很大影响；
(c) 软琼脂与细胞混合时温度不能超过40℃，否则将会烫伤/死细胞；
(d) 接种时细胞密度适度，不可过高。

细胞在低密度、非贴壁状态条件下培养，生存率明显下降，永生细胞系/株克隆形成率可达到10%以上，但初代培养细胞和有限传代细胞系克隆形成率仅为0.5%-5%，甚至无法形成单个克隆。因此，为了提高克隆形成率，有时需要在培养基中添加胰岛素、地塞米松等促克隆形成物质。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。并且克隆形成率与接种密度有一定关系，做克隆形成率测定时，接种细胞一定要分散成单细胞悬液，直接接种在碟皿中，持续一周，随时检查，到细胞形成克隆时终止培养。

三、结果展示

四、客户提供材料
1、新鲜或正确保存的样品（按照我们的要求提供）
2、阳性对照样品（尽量提供）
3、相关文献（可选）

五、提交给客户结果
1、客户提供的实验样本
2、实验原始数据
3、完整实验报告

六、服务项目说明
1、双方签订合同后，收取70%预付后启动预实验
2、有特殊要求请咨询：400-800-8458