实时荧光定量PCR（realtime-PCR）技术是指在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最终通过相对定量或绝对定量的方法确定各个样本的本底表达量。qPCR检测常用的两种方法：染料法和TaqMan探针法。

一、实验原理
SYBR Green I 染料法
结合于dsDNA双螺旋小沟区域 ； 反应体系中游离的SYBR® Green I，几乎不发出荧光信号； 只有扩增过程中掺入双链DNA的才会发出荧光信号； 荧光信号强度与DNA分子数量成正比。

TaqMan探针法
TaqMan探针法核心是探针分子，TaqMan探针是单链DNA，5’端偶联发光基团，3’端偶联淬灭基团，游离的完整探针是检测不到荧光信号的，发光基团发出的荧光会被淬灭基团吸收淬灭，探针被水解，发光基团和淬灭基团远离就可以检测到荧光信号。反应开始时，模板链经热变性解链形成单链，TaqMan探针优先跟模板链退火，引物随后退火到模板上，之后进行链的延伸，延伸过程中Taq酶发挥5’-3’外切酶活性，遇到探针会从5’端逐个碱基切除探针，发光基团会跟淬灭基团分开，因此荧光检测系统可以接收到荧光信号，每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，荧光信号的累积和PCR产物形成是同步的。
TaqMan探针法的特异性除了由引物提供，更由探针分子保证，因其退火温度更高，所以TaqMan探针法特异性更好，在一个反应体系中加入多条探针，可以做多个基因同时检测。

二、实验流程图

三、客户提供材料
1、新鲜或正确保存的样品（按照我们的要求提供）
2、检测基因信息，引物信息，内参要求（参考QPCR项目服务信息单）
3、相关文献（可选）

四、提交给客户结果
1、客户提供的实验样本
2、实验原始数据
3、完整实验报告

五、服务项目说明
1、双方签订合同后，收取70%预付后启动预实验
2、有特殊要求请咨询：400-800-8458