技术服务
首页 > 技术服务 > 细胞功能学服务平台 > 划痕实验检测

划痕实验检测

一、细胞划痕原理
细胞划痕(wound healing)法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。

二、检测方法:
1、制备细胞悬液:细胞计数
1)所有要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min。
2、 细胞培养
1)先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,大约每隔0.5-1cm一道,横穿过孔,每孔至少穿过5条线。
2)在空中加入约5×105个细胞(具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满),37℃培养箱培养。
3)第二天用10µl枪头比着直尺,与标记线垂直的方向划两条平行线,枪头要垂直,不能倾斜。
4)用PBS洗细胞3次,去除划下的细胞,加入无血清培养基。
5)放入37℃ 5% CO2培养箱。
3、拍照  按0、6、12、24h倒置显微镜观察,拍照。

注意事项
1、在用PBS缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细胞,影响实验拍照结果。
2、一般做划痕实验,都是无血清或者低血清(<2%),否则细胞增殖就不能忽略。(也可用丝裂酶处理一小时)
3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,作为固定的检测点,以解决了前后观察时位置不固定的问题。

 
三、客户提供材料
1、新鲜或正确保存的样品(按照我们的要求提供)
2、阳性对照样品(尽量提供)
3、相关文献(可选)

四、提交给客户结果
1、客户提供的实验样本
2、实验原始数据
3、完整实验报告

五、服务项目说明
1、按照标准实验要求
1、双方签订合同后,收取70%预付后启动预实验
2、有特殊要求请咨询:400-800-8458

返回顶部