细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

一、Transwell检测原理
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。Transwell迁移实验常用8.0、12.0 µm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。

二、检测方法：
（1）所有细胞培养试剂和Transwell chamber 放在37℃温育； 
（2）待测细胞培养至对数生长期，消化细胞，用PBS和无血清培养基先后洗涤一次，用无血清培养基悬浮细胞，计数，调整浓度为2×105 /ml； 
（3）在下室（即24孔板底部）加入600－800μl 含10％血清的培养基，上室加入100－150μl细胞悬液，继续在孵箱培养24小时； 
（4）用镊子小心取出chamber，吸干上室液体，移到预先加入约800μl甲醇的孔中，室温固定30分钟； 
（5）取出chamber，吸干上室固定液，移到预先加入约800μl Giemsa染液的孔中，室温染色15－30分钟； （6）轻轻用清水冲洗浸泡数次，取出chamber，吸去上室液体，用湿棉棒小心擦去上室底部膜表面上的细胞； （7）用小镊子小心揭下膜，底面朝上晾干，移至载玻片上用中性树胶封片； 
（8）显微镜下取9个随机视野计数，统计结果。

注意事项
（1）根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber。常用的为8.0-μm孔径（如AGS细胞），如果细胞体积较大可以考虑用10-μm孔径； 
（2）根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24-well chamber接种细胞数约为2≈5×104/well，迁移时间12≈36小时； 
（3）由于Corning公司的24-Transwell内含12个独立的chamber，为了避免操作污染，每次实验可预先另准备一块24孔普通培养板（Corning）； 
（4）如果细胞迁移能力较弱，下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的上清加50μg/ml FN（Fibronectin），具体可查阅相关文献； 
（5）细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水平； 
（6）固定染色擦洗时动作小心，避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜表面上未迁移的细胞，以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小镊子缠上湿棉花擦洗，但要小心避免将膜戳破；
（7）Chamber和膜上都无法标记，操作时应小心避免混淆实验组和对照组； 
（8）充分晾干，避免残留水分导致镜下聚焦不一致。 

细胞侵袭实验 （cell invasion assay） 

实验材料： 
（1）Matrigel (BD 5mg/ml)，-20℃保存 
（2）其余材料同迁移实验 

操作步骤 
（1）Matrigel在4℃过夜融化； 
（2）用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1mg/ml，冰上操作； 
（3）在chamber上室底部中央垂直加入100μl稀释后的Matrigel，37℃温育4－5小时使其干成胶状； 
（4）后续步骤同迁移实验（1-8）。 

注意事项 
（1）Matrigel在过高或过低的温度均易凝固，因此操作所需枪头和离心管应提前在4℃预冷； 
（2）铺胶时保证液面水平，胶的厚度均匀一致，切勿产生气泡；
（3）其他注意事项同迁移试验。

三、结果展示

四、客户提供材料
1、新鲜或正确保存的样品（按照我们的要求提供）
2、阳性对照样品（尽量提供）
3、相关文献（可选）

五、提交给客户结果
1、客户提供的实验样本
2、实验原始数据
3、完整实验报告

六、服务项目说明
1、双方签订合同后，收取70%预付后启动预实验
2、有特殊要求请咨询：400-800-8458