一、ELISA检测原理
酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。

二、检测方法：
夹心法ELISA：
1、加样：将标准品工作液依次加入到前两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔，每孔100 μL。待测样品加入到其他孔，每孔100 μL(若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后取样)。给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内。
2、生物素化抗体/抗原：弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中立即加入生物素化抗体/抗原工作液100 μL，混匀，酶标板加上覆膜， 37℃孵育1小时。
3、洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350 μL，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。
提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。
4、HRP酶结合物：每孔加酶结合物工作液100 μL，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。
5、洗涤：弃去孔内液体，洗板5次，方法同步骤3。
6、底物：每孔加底物溶液(TMB) 90 μL，混匀，加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。
7、终止：每孔加终止液50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
8、读值：立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪预热，设置好检测程序。
9、 实验完毕后，将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。

竞争法ELISA：
1、加样：将标准品工作液依次加入到前两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔，每孔50 μL。待测样品加入到其他孔，每孔50 μL(若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后取样)。立即每孔加入配好的生物素化抗体工作液50 μL。混匀，给酶标板覆膜，37℃孵育45分钟。提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，避免产生气泡。加样时间宜控制在10分钟内。
2、洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350 μL，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。
3、HRP酶结合物：每孔加酶结合物工作液100 μL，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。
4、洗涤：弃去孔内液体，洗板5次，方法同步骤2。
5、底物：每孔加底物溶液(TMB) 90 μL，混匀，加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。
6、终止：每孔加终止液50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。
7、读值：立即用酶标仪在450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪预热，设置好检测程序。
8、实验完毕后，将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至保质期。

三、结果展示

四、客户提供材料
1、新鲜或正确保存的样品（按照我们的要求提供）
2、阳性对照样品（尽量提供）
3、相关文献（可选）

五、提交给客户结果
1、客户提供的实验样本
2、实验原始数据
3、完整实验报告

六、服务项目说明
1、ELISA实验我们按照标准实验要求：1000元/板，含有标准品+待测样本，至少做1个复孔
1、双方签订合同后，收取70%预付后启动预实验
2、有特殊要求请咨询：400-800-8458